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1. 離子交換劑的選擇
離子交換劑的種類很多，離子交換層析要取得較好的效果首先要選擇合適的離子交換劑。
首先是對(duì)離子交換劑電荷基團(tuán)的選擇，確定是選擇陽(yáng)離子交換劑還是選擇陰離子交換劑。這要取決于被分離的物質(zhì)在其穩(wěn)定的pH下所帶的電荷，如果帶正電，則選擇陽(yáng)離子交換劑;如帶負(fù)電，則選擇陰離子交換劑。例如待分離的蛋白等電點(diǎn)為4，穩(wěn)定的pH范圍為6-9，由于這時(shí)蛋白帶負(fù)電，故應(yīng)選擇陰離子交換劑進(jìn)行分離。強(qiáng)酸或強(qiáng)堿型離子交換劑適用的pH范圍廣，常用于分離一些小分子物質(zhì)或在pH下的分離。由于弱酸型或弱堿型離子交換劑不易使蛋白質(zhì)失活，故一般分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)常用弱酸型或弱堿型離子交換劑。
其次是對(duì)離子交換劑基質(zhì)的選擇。前面已經(jīng)介紹了，聚苯乙烯離子交換劑等疏水性較強(qiáng)的離子交換劑一般常用于分離小分子物質(zhì)，如無(wú)機(jī)離子、氨基酸、核苷酸等。而纖維素、葡聚糖、瓊脂糖等離子交換劑親水性較強(qiáng)，適合于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。一般纖維素離子交換劑價(jià)格較低，但分辨率和穩(wěn)定性都較低，適于初步分離和大量制備。葡聚糖離子交換劑的分辨率和價(jià)格適中，但受外界影響較大，體積可能隨離子強(qiáng)度和pH變化有較大改變，影響分辨率。瓊脂糖離子交換劑機(jī)械穩(wěn)定性較好，分辨率也較高，但價(jià)格較貴。
另外離子交換劑顆粒大小也會(huì)影響分離的效果。離子交換劑顆粒一般呈球形，顆粒的大小通常以目數(shù)(mesh)或者顆粒直徑(mm)來(lái)表示，目數(shù)越大表示直徑越小。前面在介紹交換容量時(shí)提到了一些關(guān)于交換劑顆粒大小、孔隙的選擇。另外離子交換層析柱的分辨率和流速也都與所用的離子交換劑顆粒大小有關(guān)。一般來(lái)說(shuō)顆粒小，分辨率高，但平衡離子的平衡時(shí)間長(zhǎng)，流速慢;顆粒大則相反。所以大顆粒的離子交換劑適合于對(duì)分辨率要求不高的大規(guī)模制備性分離，而小顆粒的離子交換劑適于需要高分辨率的分析或分離。
這里特別要提到的是，離子交換纖維素目前種類很多，其中以DEAE-纖維素(二乙基氨基纖維素)和CM-纖維素(羧甲基纖維素)常用，它們?cè)谏锎蠓肿游镔|(zhì)(蛋白質(zhì)，酶，核酸等)的分離方面顯示很大的*性。一是它具有開放性長(zhǎng)鏈和松散的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有較大的表面積，大分子可自由通過(guò)，使它的實(shí)際交換容量要比離子交換樹脂大的多;二是它具有親水性，對(duì)蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)吸附的不太牢，用較溫和的洗脫條件就可達(dá)到分離的目的，因此不致引起生物大分子物質(zhì)的變性和失活。三是它的回收率高。所以離子交換纖維素已成為非常重要的一類離子交換劑。
2. 離子交換劑的處理和保存
離子交換劑使用前一般要進(jìn)行處理。干粉狀的離子交換劑首先要進(jìn)行膨化，將干粉在水中充分溶脹，以使離子交換劑顆粒的孔隙增大，具有交換活性的電荷基團(tuán)充分暴露出來(lái)。而后用水懸浮去除雜質(zhì)和細(xì)小顆粒。再用酸堿分別浸泡，每一種試劑處理后要用水洗至中性，再用另一種試劑處理，后再用水洗至中性，這是為了進(jìn)一步去除雜質(zhì)，并使離子交換劑帶上需要的平衡離子。市售的離子交換劑中通常陽(yáng)離子交換劑為Na型(即平衡離子是Na離子)，陰離子交換劑為Cl型，因?yàn)橥ǔ＿@樣比較穩(wěn)定。處理時(shí)一般陽(yáng)離子交換劑后用堿處理，陰離子交換劑后用酸處理。常用的酸是HCl，堿是NaOH或再加一定的NaCl，這樣處理后陽(yáng)離子交換劑為Na型，陰離子交換劑為Cl型。使用的酸堿濃度一般小于0.5 mol / L，浸泡時(shí)間一般30 min。處理時(shí)應(yīng)注意酸堿濃度不宜過(guò)高、處理時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)、溫度不宜過(guò)高，以免離子交換劑被破壞。另外要注意的是離子交換劑使用前要排除氣泡，否則會(huì)影響分離效果。
離子交換劑的再生是指對(duì)使用過(guò)的離子交換劑進(jìn)行處理，使其恢復(fù)原來(lái)性狀的過(guò)程。前面介紹的酸堿交替浸泡的處理方法就可以使離子交換劑再生。離子交換劑的轉(zhuǎn)型是指離子交換劑由一種平衡離子轉(zhuǎn)為另一種平衡離子的過(guò)程。如對(duì)陰離子交換劑用HCl處理可將其轉(zhuǎn)為Cl型，用NaOH處理可轉(zhuǎn)為OH型，用甲酸鈉處理可轉(zhuǎn)為甲酸型等等。對(duì)離子交換劑的處理、再生和轉(zhuǎn)型的目的是一致的，都是為了使離子交換劑帶上所需的平衡離子。
前面已經(jīng)介紹了，離子交換層析就是通過(guò)離子交換劑上的平衡離子與樣品中的組分離子進(jìn)行可逆的交換而實(shí)現(xiàn)分離的目的，因此在離子交換層析前要注意使離子交換劑帶上合適的平衡離子，使平衡離子能與樣品中的組分離子進(jìn)行有效的交換。如果平衡離子與離子交換劑結(jié)合力過(guò)強(qiáng)，會(huì)造成組分離子難以與交換劑結(jié)合而使交換容量降低。另外還要保證平衡離子不對(duì)樣品組分有明顯影響。因?yàn)樵诜蛛x過(guò)程中，平衡離子被置換到流動(dòng)相中，它不能對(duì)樣品組分有污染或破壞。如在制備過(guò)程中用到的離子交換劑的平衡離子是H或OH離子，因?yàn)槠渌x子都會(huì)對(duì)純水有污染。但是在分離蛋白質(zhì)時(shí)，一般不能使用H或OH型離子交換劑，因?yàn)榉蛛x過(guò)程中H或OH離子被置換出來(lái)都會(huì)改變層析柱內(nèi)pH值，影響分離效果，甚至引起蛋白質(zhì)的變性。
離子交換劑保存時(shí)應(yīng)首先處理洗凈蛋白等雜質(zhì)，并加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎话慵尤?.02 %的疊氮鈉，4℃下保存。
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